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肌酐檢測方法學大盤點及使用現狀

日期: 2021-08-24
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2021 - 08 - 24

什么是肌酐?

肌酐是一種低分子量的含氮化合物,由肌肉組織中的磷酸肌酸和肌酸通過非酶促、不可逆的脫磷酸反應生成的代謝終產物。肌酐僅由腎小球濾過進入原尿,不被腎小管重吸收。血中的肌酐來源包括外源性和內源性兩部分,內源性肌酐每日生成量幾乎保持恒定,嚴格控制外源性肌酐的攝入時,血肌酐濃度為穩定值,因此,血清肌酐濃度是評價腎小球濾過功能的重要指標。


肌酐測定臨床意義

1.血清肌酐:改善全球腎臟病預后組織(KDIGO)指南推薦主要基于血清肌酐(Scr)計算的估算的腎小球濾過率(GFR),作為腎功能評估和腎損傷篩查的指標。

2.尿液肌酐:尿肌酐與血清肌酐同時測定,用于計算肌酐清除率,以評價腎小球的濾過功能;尿微量白蛋白與尿肌酐比值(ACR)可作為慢性腎病診斷標志物?!吨袊悄虿∧I臟疾病防治指南》推薦2型糖尿病患者每年應至少進行一次UACR和eGFR檢測,以便早期發現糖尿病腎臟疾?。―KD)。


肌酐檢測方法學

目前檢測肌酐的方法學主要有苦味酸法、酶法、放射性核素稀釋質譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳法和電極法等。

1.?苦味酸法(Jaffe法)

是檢測肌酐最經典的方法,其原理是在堿性條件下肌酐與苦味酸反應生成橙紅色結合物,在505-520nm波長處測其吸光度來反映肌酐的水平。該方法的優點是成本地低廉,操作簡便,缺點是特異性不強,抗干擾能力差,易受血中很多“假肌酐”的干擾,如丙酮酸、膽紅素、乙酰乙酸鹽、葡萄糖、蛋白質等,這些物質也會與苦味酸發生有色反應從而影響肌酐的檢測結果。雖然有些臨床實驗室使用改良的苦味酸法,但均或多或少存在各種問題。

2.?酶法

酶法主要包括肌氨酸氧化酶法與肌酐亞胺水解酶法。肌氨酸氧化酶法是通過肌酐酶的作用使肌酐水解成肌酸和尿素,肌酸又可經一系列反應生成H2O2等,最后偶聯Trinder反應形成的醌亞胺色素與肌酐的濃度成正比,可用比色測定。肌氨亞胺水解酶法是通過肌酐亞氨基水解酶將肌酐水解,經一系列反應生成谷氨酸,通過測定340nm處的吸光度降低速率計算肌酐水平。酶法抗干擾能力相對較好且交叉污染相對少,但試劑成本相對較高。

3.同位素稀釋質譜法

該方法的原理是將已知豐度與質量的同位素稀釋劑與樣本混合,用質譜檢測混合前后樣本豐度的變化,求得樣本中某種元素水平的方法。該方法具有很高的特異性,而且精密度與準確度也非常好,不產生系統誤差,是檢驗臨床指標量值最常用的參考方法,但由于該方法的檢測成本較高和輻射污染等問題,通常只用于產生一級參考測量程序、評價參考方法和對自己標準品定值。

4.高效液相色譜法(HPLC

HPLC通過陽離子交換層析柱將肌酐分離出來,再測得其在233 nm處的A值,從而檢測出血肌酐水平。該方法的精密度和準確度高,特異型好,但檢測過程比較繁瑣,并不適合用于臨床大批量樣本的檢測,通常作為肌酐測定的參考方法。

5.毛細管電泳法

毛細管電泳法是通過毛細管電泳將血清中的肌酐分離出來,然后檢測234 nm處的吸光度計算肌酐值。該方法效率高,樣本用量少,分析速度快,并可排除體內“假肌酐”對血肌酐測定的干擾。但毛細管內壁易吸附蛋白質,導致該法的重復性較差,因此不適用于臨床常規檢測。

6.電極法

電極法是通過半酶法,利用離子選擇性電極對肌酐進行測定的一種方法。該方法雖然操作比較簡單,速度也較快,但抗內源性物質干擾的能力較差,故在臨床上也并不常用。


我國室間質評情況

目前在國家藥監局網站獲得肌酐檢測注冊證的廠家所采用的方法學主要為苦味酸法和酶法,其中注冊苦味酸的廠家約60余家,注冊酶法的廠家約有200余家,參加室間質評的單位主要也是使用的苦味酸法和酶法。

通過對全國1402家實驗室發放的5個不同濃度批次的質評物進行肌酐檢測的室間質評調查,按照2種檢測方法(苦味酸法和酶法)和11套檢測系統分組,結果分析中,苦味酸法組CV范圍為1.03~18.23%,酶法組CV為1.5~8.08%,肌酐不同檢測系統試驗室間變異情況酶法組優于苦味酸法組。

在廣東2014年室間質評中,第一次室間質評有71家實驗室使用苦味酸法,52家使用酶法,第二次有37家使用苦味酸法,64家使用酶法。第一次室間質評苦味酸法和酶法能力比對檢驗(PT)合格率分別為57.46%和83.85%,第二次分別為83.78%和97.19%,苦味酸法檢測的變異系數在6.67%~19.26之間,酶法變異系數在3.78%~11.43%之間,可以看出酶法檢測肌酐的質量明顯優于苦味酸法。

在對天津109家實驗室室間質評結果分析中,測定高值質控品苦味酸法和酶法平均CV分別為8.7%和3%,低值質控平均CV分別為34.3%和9.3%,可見基質效應對肌酐測定結果尤其是苦味酸法檢測低值質控影響很大,酶法測定結果顯著優于苦味酸法。

小結

通過肌酐注冊和實驗室使用情況來看,目前檢測肌酐主要使用的方法學為苦味酸法和酶法,兩種方法各有優劣勢,苦味酸法檢測成本低,但干擾因素多,而酶法雖成本更高,但結果準確性和重復性更好,線性范圍更寬,因此推薦有條件的實驗室可使用酶法檢測肌酐。

國賽現已獲肌酐檢測試劑盒注冊證,使用的方法為肌氨酸氧化酶法,用于Aristo U和Aristo Ur檢測系統,可聯合多種散射比濁法尿特定蛋白在同一臺儀器上檢測,同時出具ACR和各尿蛋白的檢測結果,并可以尿液流水線軌道聯機,實現一管尿液多項檢測,為腎臟病的診斷提供更簡便、更完善的解決方案。

肌酐檢測方法學大盤點及使用現狀

肌酐檢測方法學大盤點及使用現狀

參考文獻

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